胚胎干細胞（ESC，EmbryonicStemCells）是一類具有自我更新能力并且能夠分化為多種細胞類型的多能性干細胞。由于其在基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用中的巨大潛力，胚胎干細胞的培養(yǎng)技術(shù)成為了干細胞研究領(lǐng)域的核心技術(shù)之一。
胚胎干細胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法和使用涉及細胞培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基成分以及操作技巧。下面詳細介紹胚胎干細胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法和使用注意事項：
1.胚胎干細胞的培養(yǎng)條件
胚胎干細胞需要非常特定的培養(yǎng)條件以維持其自我更新和多能性特性。以下是常見的培養(yǎng)條件：
a.培養(yǎng)基
胚胎干細胞的培養(yǎng)基通常由基礎(chǔ)培養(yǎng)液和添加劑組成?；A(chǔ)培養(yǎng)液大多選用如DMEM/F-12（Dulbecco’sModifiedEagleMedium/F-12）或KnockOutDMEM，這些培養(yǎng)基含有胚胎干細胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)。
添加劑通常包括：
LIF（LeukemiaInhibitoryFactor）：LIF是一種支持小鼠胚胎干細胞維持未分化狀態(tài)的因子，阻止其分化。對于人類胚胎干細胞，LIF通常不起作用，但可以使用其他因子（如bFGF）來替代。
bFGF（BasicFibroblastGrowthFactor）：對人類和小鼠胚胎干細胞的增殖有重要作用。
抗生素（如青霉素/鏈霉素）：預(yù)防細菌污染。
葡萄糖、氨基酸、維生素等：保證細胞的基本營養(yǎng)需求。
b.培養(yǎng)皿與涂層
為了防止胚胎干細胞在培養(yǎng)過程中附著到培養(yǎng)瓶的表面，通常需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿表面涂上一層基質(zhì)物質(zhì)，如Matrigel、Geltrex、明膠或laminin等。這些基質(zhì)能夠促進干細胞的附著，并支持其增殖。
c.培養(yǎng)溫度和CO?濃度
培養(yǎng)胚胎干細胞的溫度通常設(shè)定在37°C。
5%CO?濃度對維持細胞培養(yǎng)基的pH值至關(guān)重要。
d.氧氣濃度
胚胎干細胞的培養(yǎng)一般是在常規(guī)培養(yǎng)條件下（常氧環(huán)境）進行，但對于某些類型的干細胞，低氧（約5%O?）環(huán)境有時也被用于培養(yǎng)。
e.培養(yǎng)周期
每2–3天換一次培養(yǎng)基，確保為細胞提供新鮮的養(yǎng)分，并去除代謝廢物。
2.胚胎干細胞的培養(yǎng)方法
胚胎干細胞的培養(yǎng)過程包括以下幾個步驟：
a.細胞接種
將胚胎干細胞從凍存狀態(tài)復(fù)蘇或從先前的培養(yǎng)皿中傳代。
需要通過顯微鏡觀察細胞的生長狀態(tài)。接種時，細胞濃度應(yīng)控制在適當?shù)姆秶鷥?nèi)，以確保細胞能夠均勻分布，避免細胞過于擁擠導(dǎo)致的細胞死亡。
b.培養(yǎng)觀察
每日觀察細胞形態(tài)。健康的胚胎干細胞通常呈現(xiàn)為小、圓形、成群生長的形態(tài)，細胞之間通常有緊密的接觸。
如果觀察到細胞形
